HISTOLOGÍA HUMANA
Técnica histológica
Inmunocitoquímica
Tiene como principal fundamento fijar la acción entre en el antígeno y el anticuerpo.
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Los anticuerpos son glucoproteínas elaboradas por células del sistema inmune o inmunológico, dando como respuesta a una proteína extraña denominada antígeno.
En el área de estudio (laboratorio) estos son purificados de la sangre (extraerse) y puede fusionarse con un colorante fluorescente.
Dichos colorantes o sustancias químicas como lo son los fluorocromos, tienen la capacidad de absorber luz en longitud de ondas diferentes, un ejemplo de esto es la luz ultravioleta, para luego emitir una luz visible de una longitud de onda especifica.
El colorante más usado en los laboratorios es la fluoricenina este absorbe o atrae la luz ultravioleta para así emitir la luz de color. los anticuerpos fusionados con este pueden aplicarse a un corte de tejido histológico. Sobre un portaobjetos para poder localizar antígenos en las células y en los tejidos para luego observarse en el microscopio de fluorescencia.
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Se le llama técnicas histologicas a la secuencia de pasos que se tienen que tener en cuenta al momento de preparar una muestra histológica, para luego ser observada en el microscopio.
1) OBTENCIÓN DE LA MUESTRA:
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Se puede dar mediante 3 procesos
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Biopsia: esta consiste en tomar una muestra de un paciente vivo.
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Necropsia: en este caso se extrae una porción o la muestra de un cadáver.
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Autopsia: consiste en el estudio del cuerpo completo.
2) FIJACIÓN:
El proceso de fijación se da con el propósito de evitar la destrucción de la muestra y sirve para mantener la estructura de esta lo mas parecido posible a la original. Existen varios tipos de fijadores:
• Físicos:
Por ebullición o por congelación.
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• Químicos:
Se usan soluciones simples como y el cloro formol al 10%.
- Mezclas fijadoras. Se usan diferentes fijadores en una sola mezcla para facilitar la fijación de ciertas estructuras.
3) DESHIDRATACIÓN:
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Se coloca la muestra en alcoholes de concentración creciente para eliminar el agua que contenga la muestra.
4) ACLARACIÓN:
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Son solventes que producen transparencia en los tejidos, además de solubilizar la parafina.
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5) INCLUSIÓN
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En parafina: la parafina penetre en los tejidos, luego se enfría bruscamente colocando el recipiente en hielo.
6) PREPARACIÓN
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Se corta un trozo de parafina que contiene la muestra en forma de pirámide truncada, de tal manera que la misma quede sobre la base menor.
7) CORTE:
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Se realiza mediante el uso del micrótomo de congelación permite cortar el tejido después de fijarlo por frío, este se congela con dióxido de carbono y se endurece para que luego pueda ser cortado.
8) COLOCACIÓN
Sobre el portaobjeto: ya realizados los cortes se colocan en agua tibia para que este se dispersen y luego se recogen con un pincel y se extiendan en el portaobjetos. finalmente se dejan secar para su posterior coloración.
9) DESPARAFINIZACIÓN:
se debe extraer todo la parafina del tejido y aclararlo nuevamente.
10) HIDRATACIÓN:
se debe hidratar el tejido ya que la mayoría de los colorantes son de base acuosa. Para ello se coloca el portaobjeto en soluciones de etanol.
11) COLORACIÓN:
es un proceso complejo fisicoquímico que le confiere color a los tejidos durante tiempos prolongados. con sustancias químicas comunes para su coloración como lo son la hematoxilina y eosina, azul de metileno entre otros
12) DESHIDRATACIÓN:
se realiza para evitar la descomposición del montaje por presencia de agua en el tejido y preservar los preparados por un tiempo prolongado y así puedan ser usadas las muestras un gran numero de veces en el laboratorio.
13) ACLARACIÓN:
Se utiliza xilol o benzol, y sirve para diluir la resina adhesiva utilizada para pegar el cubre objeto y ayudar a la conservación del montaje.
14) COLOCACIÓN:
Se cubre el corte con un delgado vidrio para que fije el tejido próximo a analizar a la vista de un microscopio
Histoquimica y Citoquimica
Son el conjunto de procedimientos químicos específicos que nos facilitan obtener información detallada de cada una de las células (función y componentes) extracelular de cada uno de los tejidos.
Cada uno de estos métodos histoquímicas y citoquimicos están fundamentados en la unión especifica de los colorantes y en el uso de anticuerpos con afinidad de colorantes fluorescentes los cuales son dirigidos contra un componente celular en particular o en la actividad enzimática de un elemento que constituye una célula en particular.
Microscopia
Se usa básicamente para el estudio de un material biológico. Este instrumento aumenta el tamaño de la imagen y permite ver más detalles precisos del corte histológico.
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Se clasifica en:
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MICROSCOPIA ÓPTICA: Permite aumentar de tamaño ya preparada previamente con técnicas histológicas para su montaje en el microscopio óptico y su manipulación manual.
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MICROSCOPIA ELECTRÓNICA: Existen dos tipos de microscopia electrónica que aportan datos morfológicos de las células y los distintos tejidos que constituyen a esta.
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Microscopia electrónica de transmisión: utiliza haz de electrones para transmitir una imagen.
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Microscopia electrónica de barrido: en este microscopio el haz de electrones no traspasa la muestra, debido a que explora solo la superficie de esta.
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MICROSCOPIA DE FUERZA ATOMICA: Usa una púa muy fina en un soporte móvil explora la muestra siguiendo líneas paralelas a lo largo de un eje “x” y uno “y”. este instrumento se diferencia de los ópticos debido a que la muestra no tiene que estar al vacío e incluso puede verse imágenes de células vivas y las que lo rodean.
